分離方法：

1、差速沉降離心法：

這是一種常見的離心方法。也就是說，在不同的離心速度和不同的離心時間下，采用逐漸增加離心速度或低速和高速交替離心的方法，使具有不同沉降速度的顆粒分批分離。該方法通常用于分離沉降系數(shù)差異較大的顆粒。

2、密度梯度帶離心法(簡稱區(qū)帶離心法)：

區(qū)域帶離心法是將樣品添加到惰性梯度介質(zhì)中進行離心沉降或沉降平衡在一定的離心力下將粒子分配到梯度中的某些特定位置，形成不同區(qū)域帶的分離方法。該方法的優(yōu)點是：①分離效果好，可一次獲得較純顆粒；

（1）差速區(qū)帶離心法：當(dāng)不同顆粒之間存在沉降速度差時（不需要差速沉降離心法要求的大沉降系數(shù)差）。在一定的離心力作用下，顆粒以一定的速度沉降。在密度梯度介質(zhì)的不同區(qū)域形成區(qū)域帶的方法稱為差速區(qū)帶離心法。該方法僅用于分離具有一定沉降系數(shù)差的顆粒（20的沉降系數(shù)差或更少）或具有分子量差的蛋白質(zhì)，這與顆粒的密度、相同大小和不同密度的顆粒（如線粒體、溶酶體等）無關(guān)。

離心管首先安裝密度梯度介質(zhì)溶液，并在梯度介質(zhì)的液體表面添加樣品液體。離心時，由于離心力的作用，顆粒離開原樣品層，根據(jù)不同的沉降速度沉降到管道底部。離心一段時間后，沉降顆粒逐漸分離，*然后形成一系列界面清晰的不連續(xù)區(qū)帶。沉降系數(shù)越大，沉降越快，區(qū)帶越低，離心沉降越低*在快速大顆粒到達(dá)管道底部之前，樣品顆粒的密度應(yīng)大于梯度介質(zhì)的密度。梯度介質(zhì)通常使用蔗糖溶液，其梯度介質(zhì)通常使用蔗糖溶液*高密度和濃度可達(dá)1.28kg/cm3和60。離心法的關(guān)鍵是選擇合適的離心速度和時間。

（2）等密度區(qū)帶離心法：梯度介質(zhì)預(yù)先放置在離心管中，將樣品添加到梯度液體表面，或?qū)悠放c梯度介質(zhì)溶液混合，然后放入離心管中，通過離心形成梯度。這是在離心密度區(qū)域產(chǎn)生梯度的兩種方式。離心時，樣品的不同顆粒向上漂浮，移動到與其密度相等的特定密度點的梯度位置，形成幾個不同的區(qū)域，即等密度離心法。當(dāng)系統(tǒng)達(dá)到平衡狀態(tài)時，延長離心時間和提高轉(zhuǎn)速是沒有意義的。離心時間不再影響等密度點上樣品顆粒的區(qū)域形狀和位置。提高轉(zhuǎn)速可以縮短達(dá)到平衡的時間，離心所需的時間*小顆粒到達(dá)等密度點(即平衡點)的時間為基準(zhǔn)，有時長達(dá)幾天。等密度離心法的分離效率取決于樣品顆粒的浮力密度差。密度差越大，分離效果越好，與顆粒的大小和形狀無關(guān)，但尺寸和形狀決定了平衡的速度、時間和區(qū)域帶寬。密度帶離心法中使用的梯度介質(zhì)通常是氯化的CSCl，其密度可達(dá)1.7g/cm3。這種方法可以分離核酸、亞細(xì)胞器等，也可以分離復(fù)合蛋白，但是簡單蛋白不適用。

收集區(qū)帶的方法有很多，例如：

(1)離心管上部用注射器和滴管吸出。

(2)有針刺穿離心管底部滴出。

(3)用針刺穿離心管區(qū)帶部分的管壁，將樣品帶拉出。

(4)將一根細(xì)管插入離心管底部，泵入超過梯度的介質(zhì)*高密度替代液，壓出樣品和梯度介質(zhì)，用自動部分收集器收集。